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農業農村部種業管理司關于印發《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》的通知
發布日期: 2019-06-17  實施日期: 2019-06-17  有效狀況: 已實施  發布部門: 農業農村部  代號: 農種畜函〔2019〕14號
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農業農村部種業管理司關于印發《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》的通知

 

農種畜函〔2019〕14號

 

各省、自治區、直轄市農業農村(農牧)、畜牧獸醫廳(委、局),新疆生產建設兵團農業農村局、黑龍江省農墾總局,各有關單位:

為貫徹落實《鄉村振興戰略規劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》,切實加強我國地方豬遺傳資源保護,有效應對非洲豬瘟疫情的嚴重威脅,農業農村部種業管理司決定開展國家級地方豬遺傳材料采集保存工作。現將《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》印發你們,請按照方案要求,認真抓好相關任務措施落實。如有不可抗力等有關情況,及時向我司畜禽種業處、全國畜牧總站反饋。

聯系人及電話:

種業管理司畜禽種業處 周曉鵬 010—59193287

全國畜牧總站畜禽資源處 張桂香 010—59194625

 

 

 

             農業農村部種業管理司

               2019年6月17日

 

 

國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案

 

為貫徹落實《鄉村振興戰略規劃(2018-2022年)》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》,有效應對非洲豬瘟疫情對地方豬遺傳資源的嚴重威脅,加快國家級地方豬品種遺傳材料采集和保存,提高地方豬遺傳資源保護能力,維護地方豬遺傳資源的系統性和完整性,制定本方案。

一、目的意義

我國地方豬遺傳資源具有抗逆性強、耐粗飼、繁殖率高、肉質優良等特性,利用地方豬遺傳材料開展育種工作,有利于提高生豬種業競爭力,發展特色畜牧業,滿足城鄉居民多樣化、高品質消費需求。當前非洲豬瘟防控形勢復雜嚴峻,對地方豬遺傳資源安全造成重大威脅。采用超低溫冷凍技術,采集保存我國地方豬品種的DNA、精液、體細胞及腸道菌群等遺傳材料,是應對非洲豬瘟疫情威脅,豐富地方豬品種保護手段,完善家畜遺傳資源保種體系,推動生豬種業健康可持續發展的重要途徑。

二、主要任務

(一)采集制作遺傳材料

采集制作61個國家級保種場、保護區內國家級地方豬精液、體細胞等遺傳材料(見附件1)。每個地方豬品種收集不少于120份耳組織樣(>2克/份);每個品種制作冷凍精液不少于15000劑(0.25mL細管)或者7500劑(0.5mL細管);每個品種制作體細胞系不少于222份(每份1mL):每個品種收集不少于120份健康后備豬新鮮糞便樣品。

(二)構建國家級地方豬遺傳材料信息數據庫

在采集遺傳材料的同時,收集供體出生日期、三代以內系譜信息、性能測定等表型記錄數據,構建國家級地方豬遺傳材料信息數據庫。

三、任務分工

(一)全國畜牧總站。具體組織項目實施,制定遺傳材料采集制作和驗收標準,在江西農業大學、云南農業大學等單位協助下開展技術培訓,進行督導檢查與驗收,集中保存遺傳材料,收集匯總記錄檔案。指導中國農業大學構建采集遺傳材料信息數據庫,做好數據庫運行和維護工作

(二)保種場(保護區)。協助開展遺傳材料采集和制作,以及病毒、細菌檢測等工作,協助提供供體三代以內系譜(需簽字蓋章)、生產性能測定等數據以及正面、側面數碼照片各1張。

(三)遺傳材料制作單位。江西農業大學、云南農業大學等遺傳材料采集制作單位,與全國畜牧總站簽訂安全和保密承諾書,采集制作遺傳材料并開展病毒、細菌等檢測(見附件2、3),提供檢測報告或者相關證明材料,填報相關數據(見附件4、5、6、7),按期將制作產品運送至國家級家畜基因庫保存

江西農業大學豬遺傳改良與養殖技術國家重點實驗室和云南農業大學協助全國畜牧總站制定遺傳材料采集技術規范,進行技術指導,備份采集的遺傳材料,定期向全國畜牧總站書面匯報工作進展。

四、進度安排

1月至6月中旬制定實施方案,明確參與遺傳材料集單位的任務,與有關單位簽訂購買服務合同。

6月下旬舉辦國家級地方豬遺傳材料采集制作培訓班,全面啟動相關工作

6月下旬至12:開展遺傳材料采集制作及入庫保存工作。對各制作單位收集制作遺傳材料進行質量抽查

12月底:遺傳材料制作單位提交項目執行情況總結報告

五、保障措施

(一)加強組織領導。農業農村部種業管理司負責總體統籌協調,省級農業農村主管部門積極協調配合本轄區內工作。全國畜牧總站牽頭組織實施,省級畜牧技術推廣機構、遺傳材料制作單位以及國家級地方豬保種場(保護區)、地縣農業農村部門、各級種業管理系統等通力協作、密切配合,確保高效完成工作。

(二)規范開展工作。加強對制作單位和保種場(保護區)的培訓指導,強化項目參與人員、遺傳材料、數據信息等管理保證遺傳材料質量與生物安全明確所收集遺傳材料的所有權使用權等相關專項成果等按照國家法律法規及相關規定實現共享

(三)嚴格經費使用管理。承擔單位應加強項目經費管理,建立健全內審機制,專款專用,明確經費預算、使用范圍,嚴格按照預算支出。項目組織實施單位會同地方主管部門,定期不定期對項目單位的資金使用情況、執行進度等進行督導,保障項目規范有序實施

 

附件:1.任務分工表

      2.國家級地方豬遺傳材料制作及質量檢測方案

3.疫病檢測清單

4.遺傳材料采集供體登記表

5.精液采集和制作記錄表

6.體細胞制作記錄表

          7.國家級家畜基因庫樣品采集記錄表


 

附件1           

任務分工表

序號

承擔單位

品種(類群)

保種場(區)

1

山西農業大學

馬身豬

山西省大同市種豬場

2

東北農業大學

民豬*

黑龍江省蘭西縣種豬場

3 

遼寧絨山羊原種場有限公司

民豬*

遼寧省家畜家禽遺傳資源保存利用中心荷包豬保種場

4

上海農業科學院

浦東白豬

上海浦匯浦東白豬繁育有限公司

沙烏頭豬*

上海崇明縣種畜場

梅山豬*

上海市嘉定區梅山豬育種中心

5

南京農業大學

二花臉豬*

常熟市牧工商總公司

二花臉豬*

常州市武進區農業局

二花臉豬*

蘇州蘇太企業有限公司

6

江蘇農林職業技術學院

梅山豬*

江蘇省蘇州蘇太企業有限公司

梅山豬*

昆山市梅山豬保種有限公司

梅山豬*

太倉市種豬場

梅山豬*

江蘇農林職業技術學院

7

揚州大學

米豬

金壇米豬原種場

沙烏頭豬*

江蘇興旺農牧科技發展有限公司

淮豬*

江蘇東海老淮豬產業發展有限公司

8

浙江大學

金華豬

浙江加華種豬有限公司

嵊縣花豬

紹興市嵊花種豬有限公司

嘉興黑豬

嘉興青蓮黑豬原種場有限公司

9

安徽農業大學

安慶六白豬

安徽省安慶市望江縣良種養殖有限公司安慶六白豬保種場

淮豬*

安徽省定遠縣種畜場

皖南黑豬

安徽省宣城市

10

江西農業大學

玉江豬

江西省玉山黑豬原種場

樂平豬

江西省東鄉縣欣榮農牧發展有限公司

華中兩頭烏

(贛西兩頭烏豬)

萍鄉市贛西兩頭烏養殖有限公司

11

青島農業大學

萊蕪豬

萊蕪市萊蕪豬原種場

里岔黑豬

青島里岔黑豬繁育基地

大蒲蓮豬

濟寧東三大蒲蓮豬原種場

12

河南農業大學

淮豬*

河南三高農牧股份有限公司

13

華中農業大學

華中兩頭烏

(通城豬)

湖北省通城縣種畜場

華中兩頭烏

(監利豬)

湖北荊貢種豬有限公司

清平豬

湖北省當陽市清平種豬場

14

湖南光大牧業科技有限公司

華中兩頭烏

(沙子嶺豬)

湖南省湘潭市家畜育種站

湘西黑豬*

湖南省桃源縣湘西黑豬(桃源黑豬)資源場

湘西黑豬*

湖南湘西牧業有限公司

15

湖南農業大學

寧鄉豬

湖南省寧鄉縣畜牧水產局(保護區)

寧鄉豬

湖南寧鄉豬原種場

大圍子豬

湖南天府生態農業有限公司

16

華南農業大學

粵東黑豬*

潮州市綠島生態農業有限公司

粵東黑豬*

蕉嶺縣泰農黑豬發展有限公司

兩廣小花豬

(廣東小耳花豬)

廣東壹號食品股份有限公司

17

中山大學

大花白豬

國家級大花白豬/藍塘豬保種場

藍塘豬

新豐板嶺原種豬場

18

福建農林大學

槐豬

上杭綠琦槐豬保種場

莆田黑豬

莆田市鄉里香黑豬開發有限公司

19

北京農學院

五指山豬*

中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所

20

海南源太奇農牧業有限公司

五指山豬*

海南省農業科學院畜牧獸醫研究所

海南豬

(屯昌豬)

海南龍健畜牧開發有限公司

21

廣西科達畜禽改良有限責任公司

兩廣小花豬

(陸川豬)*

廣西陸川縣良種豬場

香豬*

廣西環江香豬原種保種場

巴馬香豬

廣西巴馬香豬原種場

22

四川農業大學

內江豬

四川省內江市種豬場

藏豬*

四川省甘孜藏族自治州鄉城縣(保護區)

23

貴陽綠生源畜牧科技發展有限公司

香豬*

貴州省從江香豬原種繁育場

24

云南農業大學

滇南小耳豬

云南省西雙版納州種豬場

撒壩豬

云南省楚雄州種豬場

大河豬

云南省富源縣大河種豬場

25

云南省種畜繁育推廣中心

藏豬*

西藏林芝市工布江達縣(保護區)

藏豬*

云南迪慶州(保護區)

26

西北農林科技大學

漢江黑豬

陜西省勉縣黑河豬種豬場

八眉豬*

陜西省定邊縣種豬場

27

甘肅農業大學

八眉豬*

甘肅省靈臺縣八眉豬種質資源保護場

藏豬*

甘肅甘南(新審定保護區)

28

青海正雅畜牧良種科技有限公司

八眉豬*

青海省互助八眉豬原種育繁場

 

    備注:1.具體任務可根據工作需要進行適當調整。

      2.*表示該品種包括兩個或者兩個以上保護場(區)。


 

附件2

國家級地方豬遺傳材料制作及質量檢測方案

 

一、精液冷凍保存

(一)數量要求

每個保種場(保護區)的每個品種保存冷凍精液不少于15000劑(0.25mL細管)或7500劑(0.5mL細管),公豬不少于6頭,涵蓋所有家系,每個個體保存冷凍精液不少于800劑(0.25mL)或400劑(0.5mL)。

(二)供體要求

符合品種特性、特征;三代以內無血緣關系,系譜清楚;健康、必檢疾病為陰性。

(三)細管標記及包裝

應在細管上標明保種場(保護區)建設單位代碼、品種代碼、供體號和生產日期。保種場(保護區)建設單位代碼用漢語拼音大寫首字母表示,品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母,生產日期按年月日次序排列,年月日各占二位數字,年度的后兩位數組成年的二位數,月、日不夠二位的,月、日前分別加“0”補充為二位數。

    細管標記示例:

     棉塞封口端                            封口端

CQXK為重慶畜牧科學院代碼,RCZ為榮昌豬的品種代碼,11003為該公豬號,120525為2012年5月25日的生產日期。

細管裝入指形管,指形管上標記供體豬號、冷凍精液數量及生產日期。再用滅菌紗布袋將裝有冷凍精液的指形管包裝起來,一個滅菌紗布袋裝一頭豬的冷凍精液,并有標簽附在紗布袋上,放入液氮中保存。紗布袋標簽要求標記如下內容:袋號、品種、供體豬號、冷凍精液數量、解凍后精子的活力。

(四)質量檢測

1. 抽樣數量及要求

抽取總樣本量的2%進行質量檢測,檢測合格率要求達到80%以上。

2. 指標

1)0.25mL劑型冷凍精液

每支劑量≥0.18mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前進運動精子數≥2.5×107;每支細菌菌落數≤800個。

2)0.5mL劑型冷凍精液

每支劑量≥0.40mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前進運動精子數≥5.0×107;每支細菌菌落數≤1600個。   

二、體細胞冷凍保存

(一)數量要求

每個保種場(保護區)的每個品種公豬不少于12頭,涵蓋所有家系;母豬不少于25頭,每個個體體外培養原代或第1代細胞6管,每管1mL,用1.5mL或2.0mL凍存管包裝,細胞密度為1×105/mL以上

(二)供體要求

符合品種特性、特征;三代以內無血緣關系,系譜清楚;健康、必檢疾病為陰性。

(三)冷凍管標記及包裝

凍存管上標記編號、品種漢語名稱或代碼,細胞名稱或代碼、性別、培養代數、凍存日期。用滅菌紗布袋將凍存管包裝起來,一個滅菌紗布袋裝2-3頭豬的凍存管,并有標簽附在紗布袋上,放入液氮中保存。紗布袋標簽標記品種、供體豬號、凍存管數量。

(四)質量檢測

1.抽樣數量。抽取總樣本量的4%進行質量檢測,檢測合格率要求達到70%以上。

2.指標。細胞密度不低于1×105/mL;細胞活力80%以上;支原體檢測為陰性。

三、耳組織及基因組DNA樣冷凍保存

每個保種場(保護區)每個品種采樣數量40頭(對所有公豬家系全部進行采樣,繁殖公豬、繁殖母豬各1頭,以及后備公豬和后備母豬各1頭,且后備豬避免全同胞關系)。每個品種每個個體采集3份耳樣,每份耳組織樣不少于2克(用2 ml凍存管保存),凍存管上詳細標注品種、耳號、性別、采樣日期、場地等關鍵信息。耳樣采集后立即置于液氮中保存

四、腸道菌群冷凍保存

(一)數量要求

每個保種場(保護區)每個品種公豬不少于10頭,母豬不少于50頭,每頭豬采集糞便樣本2份(每份2克)。

(二)供體要求

60日齡后備豬,符合品種特性、特征;三代以內無血緣關系,系譜清楚;近一個月沒有使用抗生素、食欲正常、體重達該品種60日齡階段標準

(三)凍存管標記及包裝

凍存管上標記編號、品種漢語名稱、性別、采樣日齡、采樣日期。

(四)采樣要求和方法

1.采樣要求

1)每頭豬采集新鮮糞便樣本2份(每份2克),其中一份用2.0 mL凍存管包裝后立即投入液氮或-80保存,另一份用5.0mL凍存管取1克新鮮糞便置于3.0 mL 20%甘油和5%蔗糖的保護液中,液氮或-80保存。

2)采樣用凍存管要求無菌,配置的含20%甘油和5%蔗糖的保護液無菌。

3)從肛門采集新鮮糞便樣品,采樣時每頭豬要更換新的手套,防止交叉污染。

2.糞便樣品采集和保存方法

1)采樣前準備。2 mL5 mL凍存管高壓滅菌(或直接購買無菌凍存管);配置75%乙醇;冷凍保護液配置:以配置100mL保護液為例:無菌生理鹽水中加入20 mL甘油和5g蔗糖,混勻、定容到100 mL液氮或干冰;其它耗材:一次性手套、紙巾等。

2)樣品采集。固定采樣豬,用紙巾和75%乙醇擦洗肛門;換上一次性手套,從肛門采集糞便樣品;從采集的糞便團塊中,取中間部分糞便2克裝入2 mL凍存管,擦拭干凈凍存管,在管壁標記耳號、性別、采樣如期和年齡,立即投入液氮中;另取中間部分糞便1克裝入放有3 mL保護液的凍存管中,混勻,在管壁標記耳號、性別、采樣如期和年齡,投入液氮中。在液氮中保存,或送至實驗室后轉移到-80樣品運輸郵寄可用干冰。


 

附件3

疫病檢測清單

序號

檢測項目

檢測方法

檢測依據

1

非洲豬瘟病毒

熒光PCR

T/CVMA 5-2018非洲豬瘟病毒實時熒光PCR檢測方法

2

豬瘟病毒

熒光RT-PCR

GB/T 27540-2011豬瘟病毒實時熒光RT-PCR檢測方法/陸生動物診斷試驗和疫苗手冊2014年 2.8.3 豬瘟

3

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

熒光RT-PCR

GB/T 35912-2018 豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法/陸生動物診斷試驗和疫苗手冊2014年 2.8.6 豬繁殖與呼吸綜合征

4

豬口蹄疫病毒

熒光RT-PCR

GB/T 27528-2011 口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法

5

豬偽狂犬病毒

ELISA

GB/T 18641-2002偽狂犬病診斷技術或者NY/SY 153-2000豬偽狂犬病診斷技術規程

6

豬圓環病毒

熒光PCR

GB/T 35901-2018 豬圓環病毒2型熒光PCR檢測方法

7

豬細小病毒

熒光PCR

NY/T 2840-2015  豬細小病毒間接ELISA抗體檢測方法

8

日本乙型腦炎病毒

熒光PCR

GB_T 22333-2008 日本乙型腦炎病毒反轉錄聚合酶鏈反應試驗方法

9

豬流感病毒

RT-PCR檢測方法

GB/T 27521-2011 豬流感病毒核酸RT-PCR檢測方法

10

流行性腹瀉病毒

RT-PCR檢測方法

GB T 34757- 2017豬流行性腹瀉病毒RT-PCR 檢測方法

11

豬鏈球菌

熒光PCR檢測方法

GB/T 19915.7-2005 豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法

12

布魯氏菌抗體

虎紅平板凝集試驗、

試管凝集試驗

GB/T 18646-2018 動物布魯氏菌病診斷技術

13

豬瘟病毒抗體

ELISA

GB/T 35906-2018豬瘟抗體間接ELISA檢測方法

14

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體

ELISA

GB/T 18090-2008 豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法

15

口蹄疫病毒抗體(O型)

ELISA

GB/T 18935-2003口蹄疫診斷技術規程/陸生動物診斷試驗和疫苗手冊2012年 2.1.8 口蹄疫

16

口蹄疫病毒抗體(A型)

ELISA

GB/T 18935-2003口蹄疫診斷技術規程/陸生動物診斷試驗和疫苗手冊2012年 2.1.8 口蹄疫

17

圓環病毒抗體

ELISA

GB/T 35910-2018 豬圓環病毒2型阻斷ELISA抗體檢測方法

 

 

備注:1-5為必檢測項目,6-17為選測項目。


 

附件4  

遺傳材料采集供體登記表

保種場(區):                     時間:    年   月—    年   月     共  頁     第   頁

序號

耳號

性別

出生日期/年齡

保種場(區)

來源

親緣關系

備注

1

 

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

 

5

 

 

 

 

 

 

 

6

 

 

 

 

 

 

 

7

 

 

 

 

 

 

 

8

 

 

 

 

 

 

 

9

 

 

 

 

 

 

 

10

 

 

 

 

 

 

 

 

有系譜者不用填寫,來源:填寫省(市)、縣、鄉、村;親緣關系:填寫與收集了遺傳物質的其他個體的親緣關系,如和“XXX”“父子”或“同父”“同母”...有親緣關系但不清楚的填寫“有”,沒有親緣關系填寫“無”,親緣關系不清楚填寫“不清楚”。        

全國畜牧總站國家家畜基因庫制

附件5

精液采集和制作記錄表

保種場(區)名稱:                     

品種:                                                                   共  頁     第   頁

日期

耳號

每次射精量(mL)

總采精量(ml)

精液顏色

原精活力

原精密度(每ml)

采精人

稀釋量

稀釋后活率

平衡時間

平衡后活

冷凍時間

冷凍后活率

冷凍數量

 

袋號

一次

二次

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

全國畜牧總站國家家畜基因庫制  


 

附件6

體細胞制作記錄表

保種場(區)名稱:                     

品種:                                  共  頁     第   頁

 

序號

樣品號

耳號

性別

冷凍

日期

培養代數

數量(份)

密度

億/mL

制作人

備注

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8

 

 

 

 

 

 

 

 

 

9

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10

 

 

 

 

 

 

 

 

 

11

 

 

 

 

 

 

 

 

 

12

 

 

 

 

 

 

 

 

 

13

 

 

 

 

 

 

 

 

 

14

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15

 

 

 

 

 

 

 

 

 

16

 

 

 

 

 

 

 

 

 

17

 

 

 

 

 

 

 

 

 

18

 

 

 

 

 

 

 

 

 

19

 

 

 

 

 

 

 

 

 

20

 

 

 

 

 

 

 

 

 

全國畜牧總站國家家畜基因庫制

 

附件7

 

 

國家家畜基因庫

 

樣品采集記錄表

 

 

 

品種名稱:

保種場(區):

采樣量:

采樣人員:

采樣時間:

 

 

 

 

 

序號

采樣編號

耳號

類別

樣品類型

家系編號

備注

1

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

5

 

 

 

 

 

 

6

 

 

 

 

 

 

7

 

 

 

 

 

 

8

 

 

 

 

 

 

9

 

 

 

 

 

 

10

 

 

 

 

 

 

11

 

 

 

 

 

 

12

 

 

 

 

 

 

13

 

 

 

 

 

 

14

 

 

 

 

 

 

15

 

 

 

 

 

 

16

 

 

 

 

 

 

17

 

 

 

 

 

 

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19

 

 

 

 

 

 

20

 

 

 

 

 

 

21

 

 

 

 

 

 

22

 

 

 

 

 

 

23

 

 

 

 

 

 

24

 

 

 

 

 

 

25

 

 

 

 

 

 

注:1. 采樣編號:品種代碼(三位)和順序號(二位),其中品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母,順序號不足位數用“0”補齊。

    2. 類別:指能繁母豬、種公豬后備公豬或后備母豬。

3. 樣品類型:指耳組織血液

附件下載:
農種畜函【2019】14號-農業農村部種業管理司關于印發《國家級地方豬品種遺傳材料采集保存工作實施方案》

 

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